คุณยังสามารถละลายตัวอย่างของคุณโดยการกรองแบบอัลตราฟิลเตรชันเป็น 1 ใน 10 ของปริมาตรก่อนหน้า ซึ่งจะเจือจางอีกครั้งและทำซ้ำขั้นตอน UF วิธีที่ดีที่สุดในการแยกเกลือออกจากเกลือคือ การแยกเกลือออกด้วยการกรองเจลกับบัฟเฟอร์ 50 mM มากกว่าการกรองแบบอัลตราฟิลเตรชัน (แบบคลาสสิค ไม่ใช่แบบแรงเหวี่ยง)
การแยกเกลือออกจากโปรตีนบริสุทธิ์คืออะไร
ใช้การแยกเกลือ เพื่อขจัดเกลือออกจากสารละลายโปรตีน ฟีนอลหรือนิวคลีโอไทด์ที่ไม่ถูกรวมกลุ่มจากกรดนิวคลีอิกหรือสารเชื่อมขวางที่มากเกินไปหรือสารทำปฏิกิริยาการติดฉลากจากโปรตีนคอนจูเกต
คุณทำให้โปรตีนบริสุทธิ์ได้อย่างไร
ในการทำให้โปรตีนบริสุทธิ์จำนวนมาก ขั้นตอนแรกทั่วไปในการแยกโปรตีนคือ ตกตะกอน ด้วยแอมโมเนียมซัลเฟต (NH4) 2SO4. ทำได้โดยการเพิ่มปริมาณแอมโมเนียมซัลเฟตที่เพิ่มขึ้นและรวบรวมเศษส่วนของโปรตีนตกตะกอนที่แตกต่างกัน ต่อจากนั้น แอมโมเนียมซัลเฟตสามารถกำจัดออกได้โดยใช้การฟอกไต
บัฟเฟอร์แลกเปลี่ยนโปรตีนอย่างไร
การแลกเปลี่ยนบัฟเฟอร์ทำได้โดย การปรับสมดุลครั้งแรก ด้วยเรซินคอลัมน์ที่มีบัฟเฟอร์ที่ตัวอย่างควรจะจบลง ในทั้งสองกรณี องค์ประกอบของบัฟเฟอร์ที่นำตัวอย่างไป คอลัมน์จะถูกแทนที่ด้วยวิธีแก้ปัญหาที่คอลัมน์ถูกปรับสมดุลล่วงหน้า
เทคนิคใดต่อไปนี้สามารถใช้โครมาโตกราฟีในการแยกเกลือออกจากโปรตีนได้
ดังที่กล่าวไว้ข้างต้น เจลกรอง สามารถนำไปใช้เป็นโปรตีนได้อย่างมีประสิทธิภาพการแยกเกลือออกและทำได้โดยการปรับคอลัมน์กรองเจลด้วยน้ำก่อน อย่างไรก็ตาม การแลกเปลี่ยนบัฟเฟอร์ทำได้โดยการปรับคอลัมน์เรซินให้สมดุลกับบัฟเฟอร์เป้าหมายก่อน