ผลิตภัณฑ์ของการย่อยแบบจำกัดสามารถจัดเก็บได้ง่าย ที่ -20 C. ที่อุณหภูมิ 4 C คงจะดี แต่เพื่อให้แน่ใจว่าไม่มีกิจกรรมและไม่มีการติดดาว แนะนำให้เก็บไว้ที่อุณหภูมิ -20 C.
คุณเก็บ DNA ที่ย่อยอย่างไร
ลอง เก็บชิ้นเจลไว้ในตู้เย็นข้ามคืน หรือแม้กระทั่งละลายชิ้นในบัฟเฟอร์แล้วแช่แข็งที่ -20 °C หรือ -80 °C การเสื่อมสภาพของ DNA จะเกิดขึ้นในอัตราเดียวกันและภายใต้สภาวะเดียวกันกับ DNA ที่ละลายได้ ดังนั้นควรใช้อุณหภูมิที่เย็นกว่าเพื่อการเก็บรักษาที่ยาวนานขึ้น
การย่อยพลาสมิดหมายความว่าอย่างไร
พลาสมิด DNA ที่บริสุทธิ์จะถูกย่อยด้วย เอ็นไซม์จำกัด (REs) ตั้งแต่ 1 ตัวขึ้นไป ที่ถูกเลือกเพื่อให้มีรูปแบบแถบ DNA ที่ชัดเจน ซึ่งแก้ไขได้ง่ายด้วยอิเล็กโตรโฟรีซิส … โดยปกติแล้ว เอ็นไซม์จำกัดที่ตัดภายในไซต์การโคลนหลายจุด (MCS) และส่งผลให้มีรูปแบบการวินิจฉัย 2-5 แถบที่ง่ายต่อการแก้ไขมักจะถูกเลือก
คุณเก็บพลาสมิดเชิงเส้นอย่างไร
หากคุณกังวลเกี่ยวกับผลกระทบของ TE ที่ปลายน้ำ ให้เก็บ DNA ไว้ที่ a ความเข้มข้นที่สูงขึ้นและเจือจางเมื่อจำเป็น หรือใช้ "low TE" ซึ่งก็คือ 10 mM Tris / EDTA 0.1 มิลลิโมลาร์ เมื่อ DNA หรือ RNA สะอาด สามารถเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -20C ได้นานหลายเดือนโดยไม่ลดทอนคุณภาพใดๆ
คุณสามารถแยกแยะข้อ จำกัด ได้นานแค่ไหน
Pro-Tip ขึ้นอยู่กับการใช้งานและปริมาณของ DNA ในปฏิกิริยา ระยะฟักตัวสามารถอยู่ในช่วงตั้งแต่ 45 นาทีถึงข้ามคืนสำหรับการสรุปการวินิจฉัย 1-2 ชั่วโมงก็เพียงพอแล้วสำหรับการย่อยที่มี DNA >1 µg ที่ใช้ในการโคลน ขอแนะนำให้ย่อยอย่างน้อย 4 ชั่วโมง