จะปิดการใช้งานทริปซินได้อย่างไร?

2024 ผู้เขียน: Elizabeth Oswald | [email protected]. แก้ไขล่าสุด: 2024-01-13 00:13

เมื่อแยกเซลล์ออก ให้เพิ่มสื่อการเจริญเติบโตที่สมบูรณ์ที่เตรียมไว้ล่วงหน้า 2 เล่ม เพื่อปิดใช้งานทริปซิน ค่อยๆ กระจายตัวกลางโดยการปิปเปตเหนือผิวชั้นเซลล์หลายๆ ครั้งเพื่อให้แน่ใจว่าจะฟื้นตัวได้ >95% ของเซลล์

จะหยุดการทำงานของทริปซินได้อย่างไร

การย่อยทริปซินสามารถหยุดได้โดย freezing หรือโดยการลดค่า pH ของปฏิกิริยาที่ต่ำกว่า pH 4 โดยการเติมกรดฟอร์มิก อะซิติก หรือกรดไตรฟลูออโรอะซิติก (ทริปซินจะกลับมาทำงานอีกครั้งเมื่อ pH เพิ่มขึ้นเหนือ pH 4) ตัวอย่างที่ย่อยแล้วสามารถเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -20 องศาเซลเซียส

ทริปซินเป็นกลางอะไร

บัฟเฟอร์ ที่มีแคลเซียมและแมกนีเซียมไอออน จะชะลอการทำงานของทริปซินเช่นกัน อย่างไรก็ตาม FBS เป็นวิธีที่มีประสิทธิภาพมากกว่าในการยับยั้งการทำงานของทริปซิน

เซรั่มหยุดการทำงานของทริปซินหรือไม่

เซรั่มหยุดการทำงานของทริปซินที่เหลืออยู่ จากการย่อยด้วยเอนไซม์ของไตและเอนไซม์ย่อยโปรตีนที่สังเคราะห์ขึ้นในภายหลังโดยเซลล์ เซลล์ trypsinized ที่สดใหม่สามารถเติบโตเป็น monolayers ได้หากไม่มีเซรั่มหากล้างซ้ำ ๆ เพื่อกำจัด trypsin ที่ตกค้าง

การปิดใช้งานทริปซินต้องใช้สื่อมากแค่ไหน

ตราบใดที่คุณใช้ อัตราส่วนอย่างน้อย 1:1 ของซีรั่ม 5-10%-ที่ประกอบด้วยตัวกลางที่มีทริปซินของคุณ ก็ควรมีการยับยั้งที่เพียงพอ ตามด้วยการหมุนเหวี่ยง และแลกเปลี่ยนกลางกับสดกลาง