ยิ่งมีน้ำหนักโมเลกุลมาก ขดลวดยิ่งยาวและโมเลกุลยิ่งเคลื่อนตัวช้าลง ดังนั้น electrophoresis + SDS จะแยกจากกันตามน้ำหนักโมเลกุล ไม่ใช่บนพื้นฐานของประจุดั้งเดิม หมายเหตุสำคัญ: โดยปกติแล้ว โปรตีนที่มีความยาวเท่ากันจะไม่สามารถแยกออกได้ด้วยเจลอิเล็กโตรโฟรีซิส + SDS
คุณแยกโปรตีนที่มีน้ำหนักโมเลกุลเท่ากันได้อย่างไร
การหมุนเหวี่ยง อิเล็กโตรโฟรีซิส และโครมาโตกราฟี เป็นเทคนิคที่พบบ่อยที่สุดในการทำให้บริสุทธิ์และวิเคราะห์โปรตีน การหมุนเหวี่ยงแยกโปรตีนตามอัตราการตกตะกอนซึ่งได้รับอิทธิพลจากมวลและรูปร่างของพวกมัน
เทคนิคใดแยกโปรตีนตามประจุ
โปรตีนสามารถแยกตามประจุสุทธิได้โดย ion-exchange chromatography หากโปรตีนมีประจุบวกสุทธิที่ pH 7 โปรตีนมักจะจับกับคอลัมน์ของเม็ดบีดที่มีกลุ่มคาร์บอกซิเลต ในขณะที่โปรตีนที่มีประจุลบจะไม่ (รูปที่ 4.4)
เทคนิคใดต่อไปนี้เหมาะที่สุดในการแยกโปรตีนตามน้ำหนักโมเลกุล
วิธีโครมาโตกราฟีแบบแบ่งตามพาร์ติชั่นมีประสิทธิภาพมากในการแยกและระบุโมเลกุลขนาดเล็กเป็นกรดอะมิโน คาร์โบไฮเดรต และกรดไขมัน อย่างไรก็ตาม affinity chromatographies (เช่น ion-exchange chromatography) มีประสิทธิภาพในการแยกโมเลกุลขนาดใหญ่ออกเป็นกรดนิวคลีอิกและโปรตีน
คอลัมน์ประเภทไหนโครมาโตกราฟีแยกโปรตีนตามน้ำหนักโมเลกุล?
เจลกรอง (GF) โครมาโตกราฟี แยกโปรตีนเพียงอย่างเดียวบนพื้นฐานของขนาดโมเลกุล การแยกตัวทำได้โดยใช้เมทริกซ์ที่มีรูพรุนซึ่งโมเลกุล (ด้วยเหตุผล steric) มีระดับการเข้าถึงที่แตกต่างกัน กล่าวคือ โมเลกุลที่เล็กกว่าจะเข้าถึงได้มากกว่า และแยกโมเลกุลที่ใหญ่กว่าออกจากเมทริกซ์