การโหลดแอนติบอดีควบคุมเป็นตัวควบคุมที่สำคัญ เนื่องจากเป็นการบ่งชี้การโหลดตัวอย่างที่เท่ากันในทุกหลุม การควบคุมการโหลดยังระบุด้วยว่า การถ่ายโอนโปรตีนที่เหมาะสมไปยังเมมเบรนระหว่างกระบวนการ Western blotting การควบคุมการโหลดมักจะเป็นโปรตีนที่มีการแสดงออกสูงและแพร่หลาย
การควบคุมการโหลดทำอะไร
การควบคุมการโหลดคือโปรตีนที่ใช้เป็นตัวควบคุมในการทดลอง Western blotting … พวกเขา ใช้เพื่อให้แน่ใจว่าโหลดโปรตีนอย่างเท่าเทียมกันในทุกหลุม
ทำไมเราจึงใช้การควบคุมการโหลดใน Western blot
การโหลดการควบคุมมีบทบาทที่สองในฐานะตัวควบคุมใน Western blots สามารถใช้ เพื่อตรวจสอบว่ามีการถ่ายโอนจากเจลไปยังเมมเบรนทั่วทั้งเจล สิ่งนี้จำเป็นเมื่อเปรียบเทียบระดับการแสดงออกของโปรตีนระหว่างตัวอย่าง
คุณใช้การควบคุมการโหลดใน Western blot อย่างไร
สัญญาณจากการควบคุมการโหลดมักใช้ เพื่อทำให้สัญญาณจากโปรตีนที่สนใจเป็นปกติ หากต้องการใช้การควบคุมการโหลดสำหรับวัตถุประสงค์เหล่านี้ การตรวจจับด้วยแอนติบอดีโปรตีนควบคุมและแอนติบอดีที่ทดลองควรทำในบล็อกเดียวกัน โปรตีนหลายชนิดถูกใช้เป็นตัวควบคุมการโหลด
ทำไมจึงใช้แอคตินเป็นตัวควบคุมการโหลด
Beta-actin มักใช้เป็นตัวควบคุมการโหลดสำหรับ Western Blot toทำให้ระดับโปรตีนที่ตรวจพบเป็นปกติโดยยืนยันว่าการโหลดโปรตีนเหมือนกันทั่วทั้งเจล.