ทริปซิไนเซชันเป็นกระบวนการแยกเซลล์ออกโดยใช้ทริปซิน เอ็นไซม์โปรตีโอไลติกที่สลายโปรตีน เพื่อแยกเซลล์ที่เกาะติดกันออกจากหลอดเลือดที่เพาะเลี้ยง เมื่อเพิ่มการเพาะเลี้ยงเซลล์ ทริปซินจะทำลายโปรตีนซึ่งทำให้เซลล์สามารถเกาะติดกับเส้นเลือดได้
ทำไมเรา Trypsinize เซลล์
การทดลองมักจะทำเพื่อ อนุญาตให้เซลล์ผ่านไปยังภาชนะใหม่ การสังเกตการทดลอง หรือการลดระดับการบรรจบกันในขวดโดยเอาเปอร์เซ็นต์ของ เซลล์
trypsin แยกเซลล์อย่างไร
Trypsin/EDTA เป็นวิธีการรวมในการแยกเซลล์ Trypsin ตัดโปรตีนการยึดเกาะในปฏิกิริยาระหว่างเซลล์-เซลล์และเมทริกซ์เซลล์โดยการตัดกรดอะมิโนของโปรตีนการยึดเกาะโดยเฉพาะที่ไลซีนหรืออะจินีนบนปลาย C หากกรดอะมิโนต้นน้ำ ไม่ใช่โพรลีน
คุณจะหาเซลล์เกาะกลุ่ม trypsinized ได้อย่างไร
ขั้นตอน
- นำสื่อออกจากภาชนะเพาะเลี้ยงโดยการสำลักและล้างโมโนเลเยอร์ด้วยสารละลายเกลือที่ปราศจาก Ca2+ และ Mg 2+ เพื่อลบซีรั่มทั้งหมด …
- ฉีดสารทริปซินหรือทริปซิน/EDTA ให้เพียงพอลงในภาชนะเพาะเลี้ยงเพื่อให้ครอบคลุมเซลล์ชั้นเดียวทั้งหมด และวางในตู้อบ 37 °C เป็นเวลา ~2 นาที
ฉันจะปิดการใช้งานทริปซินในการเพาะเลี้ยงเซลล์ได้อย่างไร
เมื่อเซลล์ปรากฏแยกออก ให้เพิ่ม 2 เล่มของสื่อการเจริญเติบโตที่สมบูรณ์ที่อุ่นไว้ล่วงหน้าเพื่อปิดใช้งาน trypsin ค่อยๆ กระจายตัวกลางโดยการปิปเปตเหนือผิวชั้นเซลล์หลายๆ ครั้ง เพื่อให้แน่ใจว่ามีการฟื้นตัว >95% ของเซลล์ สำหรับวัฒนธรรมที่ปราศจากเซรั่ม สารยับยั้งทริปซินจากถั่วเหลือง (หมายเลขผลิตภัณฑ์