อย่างแรกเลย ทั้ง EcoR1 และ Xba1 ปล่อยให้ยื่น 5' เมื่อพวกเขาย่อย DNA (เช่นเดียวกับ Nde1) ในทั้งสองกรณี ปลาย 3' เป็นแบบปิดภาคเรียน ซึ่งเป็นสาเหตุที่ทำให้โพลีเมอร์สามารถเพิ่มฐานได้ ประการที่สอง พอลิเมอเรสทั้งหมดสามารถเพิ่มเบสได้เฉพาะส่วนปลาย 3' ดังนั้น Klenow จะเพิ่มเบส 4 ตัวที่ส่วนท้าย 3' ของทั้งสองส่วน เพื่อสร้างปลายทู่
เอ็นไซม์จำกัดมีฟอสเฟต 5 ตัวหรือไม่
เวกเตอร์และส่วนแทรกที่ถูกย่อยโดยเอ็นไซม์จำกัดนั้นมีการดัดแปลงขั้วที่จำเป็น (5' ฟอสเฟตและ 3' ไฮดรอกซิล) ในขณะที่ชิ้นส่วนที่สร้างขึ้นโดยปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรส (PCR) อาจไม่เป็นเช่นนั้น
ปลายทู่สามารถมัดได้หรือไม่
ligation ปลายทื่อ
ligation ปลายทื่อไม่เกี่ยวข้องกับการจับคู่ฐานของปลายที่ยื่นออกมา ดังนั้น ปลายทู่ใด ๆ ก็สามารถผูกกับปลายทู่อีกอันได้ เอ็นไซม์จำกัด เช่น SmaI และ EcoRV อาจสร้างปลายทู่ได้
Taq polymerase ผลิตปลายทู่หรือไม่
ใช่… Taq Polymerase เพิ่ม A-Overhangs หากคุณคงขั้นตอนการต่อขยายขั้นสุดท้ายที่ 72 dC บน PCR ส่วนใหญ่ใช้สำหรับ TA Cloning
เหตุใดจึงใช้ชิ้นส่วน Klenow ในการจัดลำดับ DNA
ส่วน Klenow มีประโยชน์อย่างยิ่งสำหรับงานวิจัย เช่น: การสังเคราะห์ DNA แบบสองสายจากแม่แบบสายเดี่ยว เติมส่วน DNA แบบรีพับ 3' เพื่อทำให้ส่วนที่ยื่น 5' ทื่อ . แยกยื่นยื่นออกมา 3 อัน.