วัตถุหรี่แสงไพรเมอร์มักเกิดขึ้นที่ หมายเลขรอบเกณฑ์ขนาดใหญ่ (โดยปกติคือ > 35 รอบ) ซึ่งสูงกว่าหมายเลขรอบเกณฑ์สำหรับแอมพลิคอนที่ต้องการ ไพรเมอร์ dimers เพิ่มขึ้นอย่างเห็นได้ชัดเมื่อมีการเพิ่ม DNA จีโนมที่แตกต่างกัน
คุณเห็นไพรเมอร์ไดเมอร์บน DNA เจลที่ไหน
ใน PCR ปลายทางที่ไม่ใช่เชิงปริมาณ ไพรเมอร์ไดเมอร์จะปรากฏเป็นรอยเปื้อนจางๆ บนเจล agarose ไม่มากก็น้อย ต่ำกว่ากลุ่มผลิตภัณฑ์ที่สนใจ.
ไพรเมอร์ไดเมอร์เกิดขึ้นได้อย่างไร
รูปแบบไพรเมอร์ไดเมอร์ เมื่อไพรเมอร์สองตัวจับกัน แทนที่จะเป็น DNA แม่แบบ เนื่องจากบริเวณของไพรเมอร์เสริม
คุณตรวจจับไพรเมอร์ไดเมอร์อย่างไร
วิธีที่ง่ายที่สุดในการตรวจสอบไพรเมอร์-ไดเมอร์คือ เพื่อเปรียบเทียบปฏิกิริยาของคุณกับกลุ่มควบคุมเชิงลบของคุณ (น้ำแทน DNA หรือ RNA) ไพรเมอร์หรี่จะยังคงก่อตัวในตัวควบคุมเชิงลบ ชุดไพรเมอร์บางชุดมีแนวโน้มที่จะสร้างไดเมอร์มากกว่าชุดอื่นๆ
ทำไมไพรเมอร์ไดเมอร์จึงปรากฏขึ้น
เห็นไพรเมอร์ไดเมอร์เป็นส่วนใหญ่ เนื่องจากไพรเมอร์เข้มข้นในส่วนผสมของปฏิกิริยา PCR หรือหากไม่มีการขยาย PCR และคุณสามารถเห็นไพรเมอร์ไดเมอร์ในเจล agarose หากสามารถมองเห็นผลิตภัณฑ์ PCR ได้ คุณสามารถลดความเข้มข้นของไพรม์และรักษาเงื่อนไขอื่นๆ ไว้เหมือนเดิม